核心词：宁波牙科医院 牙周 菌 斑 生物膜 模型 建立 
　　1、使用牛c-HA模拟人工根表面
　　本研究采用牛c-HA模拟人工根表面,即牙周细菌定植表面。
　　2、这三种细菌没有按顺序同时添加
　　本研究在建立血链球菌、牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌的生物膜模型时,三种细菌不按顺序同时添加,这与库克等人的研究不同。血链球菌atcc10556、核梭状芽孢杆菌atcc10953和牙龈卟啉单胞菌atcc33277由四川大学口腔疾病国家重点实验室提供。将消毒并在氯化钾缓冲液中浸泡一夜的HA盘浸入牛胶原溶液中1小时,在其表面形成胶原涂层羟基磷灰石。洗涤3次后,加入牛血清白蛋白氯化钾缓冲液。静置0.5h后,用氯化钾缓冲液洗涤3次,并吸干。Kuboniwa等人发现,当灰链球菌、核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌分别培养4和18小时时,这三种细菌在18小时时形成了相对完整的生物膜,其中灰链球菌的数量最多,牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌的数量相等,二者之间发生了共聚反应。本研究通过扫描电镜观察了不同时间点血链球菌、牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌在人工根表面形成单一菌株和混合菌株生物膜的能力。初步建立了三株细菌的单菌株、双菌株和三菌株生物膜模型,为今后龈下菌斑生物膜的细菌特性及相关研究奠定了实验基础。1.7.2对于核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌生物膜的形成,首先将c-HA圆盘置于24孔板中,分别将配置好的核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌悬浮液依次置于c-HA圆盘表面,并将其置于37℃的厌氧培养箱中24、48和72小时,然后取出c-HA圆盘,将其固定在体积分数为2.5%的戊二醛溶液中。此外,由于本研究在建立生物膜模型的过程中没有使用连续细菌培养技术,随着培养时间的延长,细菌生长所需的营养物质不断消耗,细菌活性受到影响,这也可能影响牙龈卟啉单胞菌的生长。牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌分别培养24小时形成完整生物膜,它具有三维结构（图;培养48和72小时后,两种细菌没有完整的生物膜结构,两种细菌的数量大大减少（图7.本研究的目的是简单快速地获得三种细菌的混合生物膜。
　　3、这种差异是否会影响细菌的生物学特性还有待研究
　　因此,不考虑添加细菌的顺序,但也获得了所需混合细菌的生物膜;但是,由于建立生物膜的方式和条件不同,其分布、结构和细菌在生物膜中的比例可能不同,因此这种差异是否会影响细菌的生物学特性尚待研究。本研究在建立血链球菌、核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌的生物膜模型时发现,在三个时间点形成的混合生物膜中,血链球菌和核梭状芽孢杆菌、牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌共聚合,血链球菌和核梭状芽孢杆菌数量较多,牙龈卟啉单胞菌数量很少。牙菌斑生物膜作为口腔内大多数细菌的存在方式,在抗菌敏感性、基因表达、代谢等生理现象上不同于漂浮细菌;因此,相对而言,研究生物膜中细菌的特性比研究浮游细菌更有意义和价值。扫描电镜下的血链球菌生物膜是血链球菌在人工根表面单独培养24小时形成的完整生物膜,具有三维结构（图;培养48和72小时后,细菌密度逐渐增加,生物膜变得更成熟（图2）。本研究在建立牙龈卟啉单胞菌单菌株生物膜模型时,在48小时和72小时观察到完整的生物膜,生物膜具有三维结构。本研究在48小时和72小时内反复形成并观察了牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌的双菌株生物膜。结果表明,未形成完整的生物膜,其原因有待探讨。
　　4、核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌仍然保持着相对完整的生物膜结构
　　然而,经过72小时的培养,血链球菌、核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌仍然保持着相对完整的生物膜结构,三种细菌的数量降低了单核细胞增生性链球菌的浓度,1-250ml溶液中的单核细胞增生性链球菌与1-250ml溶液中的单核细胞增生性链球菌浓度密切相关。经确认,1-250g溶液中的单核细胞增生性链球菌浓度为1-250ml溶液中的主要单核细胞增生性链球菌浓度Atcc10556,核梭状芽孢杆菌atcc10953和牙龈卟啉单胞菌atcc33277为检测菌株。厌氧培养48h后,通过形态学检查和生化鉴定,确认为纯培养物,然后转移到BHI培养基中增加细菌。Larsen等人在研究口腔细菌生物膜的抗菌敏感性检测方法时观察到,血链球菌生物膜形成的最佳时期是培养48小时后。Socransky等人从牙周炎患者中收集龈下细菌进行培养和鉴定。
　　5、结果表明
　　结果表明,血链球菌与牙龈卟啉单胞菌之间存在负相关:当血链球菌数量增加时,牙龈卟啉单胞菌的定植减少。核梭状芽孢杆菌是牙周生态系统中具有广泛凝聚力的细菌之一。它可以与口腔中几乎所有的细菌共聚。作为一种共聚合桥梁,它连接口腔中早期和晚期定植的细菌。它在促进牙菌斑生物膜的形成和成熟以及龈上菌斑向龈下菌斑的迁移方面起着重要作用。牙菌斑生物膜是口腔中大多数细菌的存在方式。当细菌从漂浮状态生长到生物膜状态时,随着生物膜状态下环境异质性的变化,其表型和基因型会发生一系列变化,从而更好地适应周围的不利环境,促进自身的生存。本研究选择24、48和72小时三个培养时间点观察生物膜的形成。
　　6、主要原因是血链球菌的对数生长期约为24小时
　　主要原因是血链球菌的对数生长期约为24小时,牙龈卟啉单胞菌和核梭菌的对数生长期约为48小时,便于在细菌生长的最佳时期观察生物膜的形成;同时选择72h观察生物膜的进一步发展。
　　7、Wright等人观察到
　　Wright等人在研究牙龈卟啉单胞菌生物膜对甲硝唑的敏感性时观察到,在培养72小时后,牙龈卟啉单胞菌在HA上形成相对完整的生物膜,宁波牙科医院这与本试验的结果相似。
　　8、本研究建立了龈下菌斑的单菌株
　　本研究建立了龈下菌斑的单菌株、双菌株和三菌株生物膜模型。脑心提取物培养基、BHI辅助琼脂、无菌除颤兔血、维生素k-氯化血红蛋白储存液、牛胶原蛋白（四川大学生物材料中心姜波教授提供）、羟基磷灰石圆片（四川大学生物材料中心提供）,氯化钾缓冲液:1mmol·L-1磷酸二氢钾、0.05mol·L-1氯化钾、0.1mmol·L-1氯化镁、1mmol·L-1氯化钙、1mmol·L-1磷酸二氢钾,pH=6.0。本研究还发现,随着时间的延长,牙龈卟啉单胞菌和核梭状芽孢杆菌在培养48小时和72小时时均未观察到完整的生物膜结构,两种细菌的数量显著减少,核梭状芽孢杆菌的数量减少。培养48小时后,三株菌的生物膜更加成熟,牙龈卟啉单胞菌的比例增加,此时,生物膜具有相对完整的三维结构（图1.在本研究中,在建立血链球菌单菌株生物膜模型时,在24、48和72小时的三个时间点观察到完整的生物膜结构。王敏峰等观察了血链球菌在1、24、48和96小时的生物膜形成,发现细菌密度血链球菌在96小时时最高。血链球菌本身聚合成一条链,具有三维结构,在48和72小时时,生物膜变得更成熟,细菌数量增加。邓辉等人研究了血链球菌对牙龈卟啉单胞菌、核梭状芽孢杆菌和中间普氏杆菌的拮抗作用,发现血链球菌对其他三种细菌均有抑制作用,对牙龈卟啉单胞菌的抑制作用最强。在研究龈下菌斑生物膜中的细菌特性时,可选择24小时建立生物膜。在这项研究中,血链球菌、核梭状芽孢杆菌和牙龈卟啉单胞菌形成单一菌株、双s
　　如果您对“宁波牙科医院牙周菌斑生物膜的体外模型建立”感兴趣，欢迎您联系我们