核心词：宁波牙科医院 烟草 烟雾 大鼠 牙槽骨 牙本质 基质 蛋白 末端 影响 
　　结果显示,对照组牙槽骨中,dmp1c末端呈深棕黄色连续线性表达,位于固有牙槽骨钙化前缘,形成明显的矿化带;棕黄色致密颗粒密集分布于骨细胞周围,矿化区内散有浅棕黄色细颗粒。以下颌磨牙颊侧为包埋面,制作5μM厚的常规蜡块近端和远端连续切片。根据吸入烟草烟雾的时间,实验组被随机分为1个月组和2个月组。
　　1、骨矿化受多种因素调控
　　骨矿化受多种因素调节,其中磷酸化的非胶原可以结合在胶原纤维的孔隙中,促进羟基磷灰石晶体的成核。体外研究表明,烟草中的尼古丁可以通过降低AKP的活性和型胶原的表达来减少骨钙化。也就是说,dmp1c末端主要表达于健康大鼠牙槽骨钙化前部和骨细胞周围,提示dmp1c末端可促进大鼠牙槽骨矿化。严格按照试剂盒说明进行免疫组化染色。实验组大鼠置于有机玻璃箱内,每日2次,每次10支香烟烟雾注射1H,间隔4h,每周6天,建立吸入烟草烟雾动物模型;对照组分为阴性对照组和阳性对照组。定量研究表明,机械负荷可使成骨细胞中的DMP1增加2~3.7倍。牙本质基质蛋白1作为磷酸化的非胶原成员之一,参与骨和牙本质的矿化。
　　2、选择下颌磨牙颊舌面中点的两个组织切片进行苏木精-伊红染色和免疫组化染色
　　选择下颌磨牙颊舌面中点的两个组织切片进行苏木精-伊红染色和免疫组化染色。小年龄:雄性Wistar大鼠出生后40~50天性成熟,80~90天身体成熟。
　　3、骨代谢旺盛
　　在身体成熟之前,骨骼仍处于生长发育阶段,具有活跃的成骨和矿化作用,钙质量快速增长,骨代谢旺盛。可以观察到快速而明显的代谢变化数据。因此,本研究选取6周龄160～180g雄性Wistar大鼠作为研究对象。根尖区的牙槽骨位于根尖周围,承受来自各个方向的咀嚼力。矿化和重建在这里十分活跃。
　　4、DMP1主要以N端和C端的形式存在
　　在骨细胞外基质中,DMP1主要以N端和C端的形式存在,其中DMP1的C端是磷灰石成核剂。各组大鼠按实验设计处死:腹腔注射10%体积分数水合氯醛麻醉,心脏解剖暴露,灌注0.9%体积分数生理盐水和4%多聚甲醛固定。Césarneto等人采用简单吸烟法,即将5只300~400g雄性Wistar大鼠放入45cm×25cm×20cm带气泵的有机玻璃箱内,两个流入和流出管给予10支香烟,每天两次,每周6天,每次8分钟。两个月后,成功建立了吸入烟草烟雾诱导牙槽骨矿物质减少的动物模型。适当的咀嚼压力可直接作用于牙槽骨的成骨细胞和破骨细胞,影响牙槽骨的重塑,促进牙槽骨成纤维细胞的活性和未分化间充质细胞的分化增殖,参与牙槽骨的代谢和重塑。
　　5、但其机制尚不清楚
　　长期暴露于烟草烟雾的大鼠牙槽骨矿化组织的比例显著降低,但其机制尚不清楚。本研究结果表明,吸入烟草烟雾的大鼠牙槽骨中dmp1c末端的表达位点与健康对照大鼠相同,但表达强度（颜色和范围）下调,且随着试验时间的延长,下调程度加剧,宁波牙科医院即,大鼠牙槽骨中dmp1c末端的下调可能是由于吸入烟草烟雾对牙槽骨矿化的抑制,并且这种效应在本试验周期中具有时间依赖性。硬门香烟:含15毫克焦油、1.2毫克尼古丁和15毫克一氧化碳;小鼠抗鼠dmp1c末端,dmp1c-clone8g103单克隆抗体（由美国德克萨斯大学贝勒学院生物医学系秦春林教授介绍）;免疫组化检测试剂盒和二氨基联苯胺显色试剂盒（武汉博德生物工程有限公司）。dmp1c末端的表达位点与对照组相同,但表达强度降低。骨是一种独特的矿化组织。
　　6、骨矿化是指成骨细胞合成和分泌有机基质
　　骨矿化是指成骨细胞合成和分泌有机基质,然后钙磷沉积的过程。Dmp1c末端可促进骨矿化,但吸入烟草烟雾对其在大鼠牙槽骨表达的影响尚未见报道。因此,本研究观察了吸入烟草烟雾对大鼠牙槽骨dmp1c末端表达的影响,以探讨吸入烟草烟雾对牙槽骨矿化的作用机制。本研究采用大鼠,观察烟草烟雾对牙槽骨dmp1c末端表达的影响,并探讨烟草烟雾对牙槽骨矿化的作用机制。牙槽嵴;B:根尖;A1,B1:阴性对照;A2,B2:阳性对照;A3、B3:吸入烟草烟雾1个月;A4、B4:吸入烟草烟雾2个月。吸烟是牙周病的重要危险因素。所有大鼠均以正常水喂养。图1A2和B2阳性对照组显示,dmp1c末端呈深棕黄色,连续线性,表达于适当牙槽骨钙化前端,形成明显矿化带;棕黄色致密颗粒密集分布于骨细胞周围,矿化区内散有淡棕黄色细颗粒;从牙槽嵴顶端到牙根尖,dmp1c末端表达强度逐渐增强,矿化带逐渐加宽。延长吸入烟草烟雾的时间:Grossi等人发现,吸入烟草烟雾的时间与牙槽骨附着丧失呈剂量依赖性。吸入烟草烟雾的时间越长,依恋的丧失越严重。因此,本研究将吸入烟草烟雾的时间延长1h,以建立动物模型。在本研究中,健康大鼠牙槽骨中dmp1c末端的表达从牙槽嵴到牙根尖逐渐增加和增宽,提示牙槽骨矿化是生物机械力作用的结果。结果表明,硬组织矿化受多种因素控制:碱性磷酸酶;碱性成纤维细胞生长因子;机械刺激;磷酸化非胶原等。1个月组,dmp1c末端在正常牙槽骨钙化前部连续线性表达,形成矿化带,呈颗粒状分布于骨细胞和矿化区周围;与对照组相比,其表达强度略有下降;dmp1c末端的表达颜色从牙槽嵴到根尖逐渐加深,矿化带变宽（图1A3,b）。为了缩短建模时间,考虑烟草烟雾体积分数对动物总体耐受性的影响,建模条件被适当地改变如下。结果与Zhang等人的结果一致,取周龄雄性Wistar大鼠30只（由哈尔滨医科大学第一附属医院实验动物中心提供）,体重160~180g,随机分为实验组和对照组。大鼠骨骼的解剖结构和骨代谢与人类有许多相似之处,因此常被用于骨代谢的研究。
　　7、体内研究表明
　　体内研究表明,低磷佝偻病小鼠的外板较少,下颌骨矿化度较低,并且存在类骨结构。这些骨样结构中dmp1c末端的信号较弱。因此,认为dmp1c末端可以促进骨矿化。因此,推测这可能与吸烟者牙槽骨的严重破坏和高水平的附着丧失有关;然而,吸烟对牙槽骨矿化的具体机制尚不清楚,需要进一步研究。有机玻璃箱:80cm×60cm×40cm,带2个排气孔,自制;徕卡dm2500光学显微镜（德国徕卡）;Nikoneclipse80i显微镜、nikonds-ri1采集系统、nis-elementsbr30图形处理系统（日本尼康）。将下颌磨牙区的牙周组织块固定24小时,置于10%EDTA脱钙溶液中,4℃脱钙。体内研究仅解释吸入烟草烟雾可降低大鼠牙槽骨矿化组织的比例,但其机制尚不清楚。功能性DMP1主要以N端和C端形式存在于骨和牙本质中。Dmp1c末端是一种磷灰石成核剂,可促进骨和牙本质矿化。吸烟2个月组,dmp1c末端在固有牙槽骨钙化前部连续线性表达,矿化带不明显,颗粒散在骨细胞和矿化区周围;与1个月组相比,表达颜色明显变浅,矿化带明显变窄;从牙槽骨
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